金铁锁毛状根的诱导和液体培养技术

【摘要】金铁锁(Psammosilenetunicoides)是中国西南地区特有的珍稀濒危药用植物，具有镇痛、抗炎、止血、免疫调节等功效，有极高的药用价值。通过发根农杆菌诱导药用植物外植体产生毛状根，然后进行液体培养，无论在生物量的增加、药用有效成分的积累还是生产稳定性方面，都显示了独特的优越性。因此，利用毛状根培养的方式获得天然活性成分，己经成为药用植物细胞工程领域的研究热点。本研究利用发根农杆菌ACCC10060侵染金铁锁幼叶及茎段，通过对外植体的选择、菌液浓度、侵染时间、预(共)培养时间、除菌条件的优化，建立金铁锁毛状根的培养体系，然后将转化的毛状根在不含激素的培养基上快速培养，并进行参数测定和形态观察分析。主要结果如下：1、根据毛状根诱导率对外植体(叶片、茎段)进行筛选，发现经过48小时预培养后，幼嫩叶片比茎段的诱导率高；转化的毛状根具有激素自养和抗卡那霉素的特性，并且组织中含有冠瘿碱，表明诱导的毛状根属于发根农杆菌侵染外植体后产生的转化根。2、在共培养基中加入乙酰丁香酮(AS)可明显提高金铁锁毛状根诱导率，AS浓度为20mg·L-1时，其诱导率最高为69%。3、在共培养后外植体的除菌过程中，在B5培养基中添加500mg·L-1头孢噻肟钠抑菌效果最佳，除菌率达83%。4、诱导的毛状根在B5无激素固体培养基中生长到2-3cm时，转入无激素的1/2MS液体培养基中培养，35d后金铁锁毛状根生物量增加了14.11倍(鲜重)和8.39倍(干重)；其总皂苷含量为0.857%(干重)，愈伤组织和原植物中分别为0.388%，0.217%。5.制备的金铁锁毛状根表现出激素自主、生长速度快、多分支等特点，适合后续毛状根规模化培养。
【作者】李景滨；
【导师】张宗申；
【作者基本信息】大连工业大学，发酵工程，2011，硕士
【关键词】金铁锁；发根农杆菌；毛状根；

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